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    胎鼠皮層神經元的原代培養

    點擊次數:160 發布時間:2021-11-19

    一、背景
    大腦皮層是調節軀體運動的高級
    中樞。它由初級感覺區、初級運動區和聯合區三部分構成。人類大腦皮層的神經細胞約有140億個,面積約2200平方厘米,主要含有錐體形細胞、梭形細胞和星形細胞(顆粒細胞)及神經纖維。

    體外原代培養神經元作為神經科學研究的有力手段,越來越受到廣大科研工作者的重視。由于神經元是一種高度分化的細胞,動物出生后很少分裂,相對于其它細胞而言,神經元在體外更難以存活和生長。因此,體外培養神經元要求的培養方法和營養條件均較為特殊。

    二、實驗步驟
    1. 無菌條件下,從懷孕18天的SD 大鼠腹中取出胚胎放入預冷的無鈣、鎂平衡鹽溶液中;
    2.在解剖顯微鏡下,分離取出胚胎大腦皮層,除去腦膜,剪碎組織(1mm3),加入0.125%胰酶-EDTA 消化液后放入 37℃孵箱內消化10 分鐘,期間搖晃一次;
    3.去掉上清,加入終止液終止消化,吹打10-15次,不能有氣泡,收集上清;剩余沉淀加入終止液繼續吹打5-10次;
    4.所收集的上清過濾后,將細胞懸液于4℃1000rpm離心10min ,棄上清,管內加入新鮮培養液重懸;
    5.臺盼藍染色計數,以 3 x 104cells/孔種入包被的24孔板,37℃,5%CO2,95%飽和濕度的培養箱中培養;
    6.每周換液兩次,每次半量換液


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